Оценку функциональной активности иммунной системы обычно проводят при аутоиммунных заболеваниях, состояниях иммунодефицита. По рекомендации экспертов ВОЗ предложен двухэтапный подход к оценке иммунного статуса здоровых и больных людей.
Первый этап — обнаружение грубых дефектов фагоцитоза, клеточного и гуморального иммунитетов. Для этого используются следующие тесты:
Второй этап — более детальный анализ состояния иммунной системы. Тесты второго уровня включают:
Эти методы используются для диагностики разнообразных иммунных реакций организма. К ним относятся методы, которые основаны на взаимодействии антигена и антитела. Они в основном используются для диагностики иммуноглобулинопатий. В современной клинической иммунохимической лаборатории используются разнообразные модификации электрофоретических и иммунопреципитационных методов.
К ним относится электрофорез в геле с анализом электрофореграммы и денситограммы. Качественно выполненный электрофорез является высокоинформативным методом, позволяющим получить предварительную характеристику белков сыворотки и других биологических жидкостей при исследовании неспецифической гуморальной защиты. В 90-х годах получил распространение другой вариант электрофореза — капиллярный. В этом варианте фракционирование белков проводится в жидкой буферной среде, заключенной в силиконовый капилляр.
Для количественного определения иммуноглобулинов, специфических антител и циркулирующих иммунных комплексов используются методы, основанные на реакции преципитации, которые могут протекать как в жидкой фазе (нефелометрический и турбодиметрический анализ), так и в агаровом геле (радиальная иммунодиффузия). Для количественного определения Ig E в сыворотке крови в низких концентрациях, определения опухолевых, вирусных, бактериальных и прочих антигенов применяют более точные методы радиоиммунного и иммуноферментного анализа.
Самым распространенным методом определения аутоантител к различным клеткам в сыворотке крови (к эритроцитам, иммуноглобулинам, митохондриям, антител к ДНК) является метод прямой и непрямой иммунофлюоресценции. Сущность метода заключается в визуализации антигена специфическими антителами с флуоресцентными маркерами.
При прямом методе иммунофлюоресценции на исследуемый препарат или в суспензию клеток наносят раствор прямо меченых флюоресцентным красителем антител. Образование комплекса антиген-антитело обнаруживается флюоресцентным сигналом в виде свечения разной степени интенсивности и четкости. В настоящее время автоматизированные методики преимущественно используют прямой метод иммунофлуоресценции.
При непрямом методе иммунофлюоресценции на препарат наносят антитела против искомых антигенов (так называемые «первые» антитела), а затем видоспецифичные «вторые» антитела против «первых» антител, что позволяет избежать неспецифических реакций. При этом только вторые антитела коньюгированны с флюоресцентным красителем. К примеру, если при исследовании в качестве «первых» антител используются мышиные антитела — mouse IgG, то в качестве «вторых» используются антивидовые anti-mouse IgG коньюгированные с флюоресцентным красителем. Комплекс антиген-антитело дает флюоресцентное окрашивание только после связывания со «вторым» антителом.
Иммунофлюоресцентный метод имеет решающее значение в ранней диагностике и лечении онкологических заболеваний (иммуногистохимия, онкогематология), диагностике инфекционных заболеваний и наследственных синдромов. Интенсивно развиваются автоматизированные методики, среди которых направления высокоинформативной микроскопии и цитометрии, комбинированные методики цитометрии-микроскопии, а также методы микрочиповой цитометрии с плазмонной голографией, в которых отдельные антитела метятся наночастицами.
Современные гистохимические методы исследования основаны на выявлении особенностей метаболических процессов, специфичных для каждого типа клеток.
Диагностическое значение имеет:
С середины ХХ века возникла новая дисциплина — молекулярная биология, которая изменила представления о механизмах функционирования биологических систем вообще и кроветворной системы в частности. Разработан метод исследования различных участков ДНК (метод рестрикции).